continuação do ácido nucléico em autista

O autismo é comum em diversas outras síndromes genéticas, complicando ainda mais seu estudo. Por exemplo, 25% dos pacientes com a síndrome do X-frágil são autistas e quase 100% dos pacientes com a síndrome de Rett apresentam níveis variados de autismo.

Essa forma sindrômica de autismo tem uma causa genética bem definida, mutações no gene chamado MeCP2. Esse gene tem a capacidade de se associar à fita de DNA e regular a atividade de outros genes.

Ácidos nucléicos em pessoas autistas

O autismo é considerado por muitos cientistas um defeito na comunicação entre as células nervosas – essa comunicação é conhecida como sinapse. Defeitos nas sinapses costumam levar a conexões nervosas erradas, contribuindo para o comportamento autista.

Sinapses são estruturas altamente complexas, resultantes da interação de diversas proteínas e ácidos nucleicos, gerados a partir da atividade de algumas centenas de genes ativados nos neurônios. Infelizmente, o autismo clássico não parece ser resultado de um ou dois genes defectivos, o que favoreceria encontrar formas químicas de intervenção. Na verdade, estudos genéticos recentes têm confirmado que seriam algumas dezenas de genes – centenas, em alguns pacientes – que não estariam funcionando normalmente. Essa complexidade genética é um grande obstáculo na busca de tratamentos.

E mais estudos de Eletroforese com Ácidos Nucleicos!!!

ELETROFORESE EM SISTEMA CAPILAR

           Durante décadas, a eletroforese em gel de poliacrilamida ou agarose foi
intensamente utilizada como uma das ferramentas mais importantes dos laboratórios
de biotecnologia e bioquímica para a análise de macromoléculas. Nos últimos anos,
porém, a eletroforese capilar tem apresentado vantagens em relação à técnica de
eletroforese em placas. Para a análise simultânea de amostras, instrumentos de
eletroforese capilar com arranjo de capilares são os mais utilizados. Existem
aparelhos que possuem desde um único capilar, até 384 capilares, possibilitando a
maximização do tempo necessário para as mais diferentes análises, desde detecção
de resíduos de explosivos e drogas, até testes de paternidade.
         A separação das macromoléculas é conduzida em tubos de dimensões de 15
a 100 µm de diâmetro interno, e 36 a 100 cm de comprimento, preenchidos com um
eletrólito. O uso do capilar fornece vantagens sobre as placas de gel devido às
razões geométricas, em que há uma elevada relação entre a área superficial e o
volume interno, permitindo a dissipação eficiente do calor gerado pela corrente
elétrica, e possibilitando a aplicação de campos elétricos elevados (100 a 500 V/cm), o que resulta em separações de alta eficiência, alto poder de resolução, e reduzido
tempo de análise.
       Em geral, um aparelho de eletroforese capilar básico consiste de uma fonte
de alta tensão, capilares (geralmente de sílica fundida), eletrodos (de platina,
normalmente), e um detector apropriado. A fonte de alta tensão é aplicada nos
eletrodos de platina situados nos reservatórios contendo uma solução eletrolítica
apropriada. As extremidades do capilar são imersas nos reservatórios da solução,
para completar o contato elétrico. As amostras normalmente são introduzidas no
capilar por métodos eletrocinéticos, nos quais uma diferença de potencial é
estabelecida entre o capilar e o recipiente que contém a amostra, durante um tempo
pré-determinado.
     O detector localiza-se em algum ponto do capilar, próximo ao reservatório de
saída.

A NOVA GENÉTICA

As unidades químicas do RNA são como as do DNA, mas o RNA contém o nucleótido uracilo (U), em vez da timina (T). Ao contrário do DNA, de cadeia dupla, o RNA normalmente está sob a forma de uma cadeia simples. E os nucleótidos de RNA contêm moléculas do açúcar ribose, em vez de desoxirribose.

O RNA é bastante flexível, ao contrário do DNA, que é uma molécula em espiral rígida e muito estável. O RNA pode torcer-se numa grande variedade de formas tridimensionais complexas. O RNA é também instável visto que as células estão constantemente a degradá-lo e a produzi-lo de novo, enquanto que o DNA não é degradado frequentemente. A instabilidade do RNA faz com que as células alterem o seu padrão de síntese proteica muito rapidamente em resposta ao que se passa no seu ambiente.

Continuando com os estudos sobre Eletroforese...

               GEL DESNATURANTE PARA RNA.

Para analisar moléculas de RNA podem ser utilizados géis de agarose e
poliacrilamida, desnaturantes ou não. As propriedades desta eletroforese são
basicamente semelhantes às de eletroforese de DNA (Patel, 1994).
A qualidade das moléculas de RNA pode ser analisada em gel de agarose
normal, feito com tampão (TBE, TAE) com água DEPC ou em gel desnaturante.
Devido a interações intramoleculares, as moléculas de RNA podem dobrar-se,
alterando a estrutura secundária e afetando a migração das moléculas no gel. O gel
desnaturante soluciona este problema, pois sob condições desnaturantes as pontes
de hidrogênio são rompidas e o RNA migra como molécula de fita simples.
Isto permite avaliar com acurácia a qualidade e o peso molecular do RNA (Sambrook,
2002; Maseka, 2005).
Dentre os desnaturantes existentes, o mais poderoso, além de caro e
altamente tóxico é o hidróxido de metil mercúrio. Porém, o mais freqüentemente
utilizado é o formaldeído, mas pode haver variantes de géis utilizando tiocianato de
guanidina, formamida e DMSO. A utilização de cada um deles apresenta vantagens
e desvantagens de acordo com a escolha do tipo de gel, poliacrilamida ou agarose,
diferentes níveis de toxicidade e potencial de desnaturação (Patel, 1994).
Os géis polimerizados com formaldeído não coram satisfatoriamente as
amostras, de forma que o brometo de etidío deve ser colocado em cada amostra
individualmente, e não no gel, como comumente utilizado (Regitano, 2001).
Outro diferencial no gel desnaturante de agarose é a utilização de MOPS (3-
N-morfolino ácido propanosulfônico). O MOPS é um excelente tampão para
manutenção de sistemas biológicos em pH neutro. É muito utilizado em biologia
molecular e bioquímica.

Uma estudante de 15 anos a partir de Vancouver desenvolve um teste de HIV instante

Este trabalho foi considerado muito valioso para regiões como a alguns países da África , onde quase nenhum acesso às provas usadas hoje.



Estudante Nicole Ticea na York House School, em Vancouver, desenvolveu um sistema de teste de HIV usando a amplificação isotérmica de ácidos nucléicos.



De acordo com o Journal of Global News Vancouver, Ticea mostrou que seu teste pode identificar com apenas uma gota de sangue, depositado em um laboratório de chip, se alguém está infectadas com o vírus.





O adolescente disse que o desenvolvimento deste projeto levou muitas horas de experimentos de pesquisa e visitas a laboratórios científicos , e combinando-o com todo o seu trabalho escolar , esportes e atividades extracurriculares. No entanto , ele diz que todo o trabalho duro , e até mesmo desistir de sua vida social , vale a pena à luz dos resultados.



A equipe de Nicole admite que a prova ainda está longe de ser amplamente utilizado e precisa passar por um exame muito mais rigorosa antes de serem levados aos seus futuros parceiros .









                

Continuando os Estudos com Eletroforese...

Para observar ácidos nucléicos em gel de agarose, deve-se corá-los e
submetê-los a uma luz ultravioleta. O corante mais comum é o brometo de etídeo,
que se intercala entre as bases do DNA (Ausubel, 1994).

Protocolo para análise de produtos de amplificação e fragmentos de

digestão em gel de agarose

gel 1% ® 0,3 g de agarose para 30 mL de gel, que deve ser preparado com

tampão Tris-Borato-EDTA 1X. Para isso, aplicar 5 ml de produto de amplificação

+ 1 ml de loading buffer.

gel 4% ® 1,2 g de agarose de baixo ponto de fusão para 30 mL de gel, que deve

ser preparado com tampão Tris-Borato-EDTA 1X. Utilizado para analisar o

resultado das digestões com enzimas de restrição. Aplicar todo o produto da

digestão (13 ml) + 2,6 ml de loading buffer.

1. Pesar a agarose

2. Colocá-la em um erlenmeyer contendo o volume necessário de tampão TBE 1X

3. Aquecer no forno de microondas até iniciar a ebulição (aproximadamente 30

segundos em potência média para um gel de 30 mL). Agitar o frasco e retornar

ao forno de microondas por mais alguns segundos

4. Aguardar a redução da temperatura para aproximadamente 60 

o C e adicionar

Brometo de Etídio, na quantidade indicada para cada gel

5. Verter no molde previamente nivelado e colocar os pentes

6. Após a solidificação, colocar o gel na cuba de eletroforese e cobrir com tampão

TBE 1X

7. Aplicar as amostras acrescidas de loading buffer e aplicar a corrente de acordo

com o tamanho do gel

O Brometo de etídio é um potente agente mutagênico. Utilizar luvas e máscara

para preparar a solução estoque e manipular os géis

A luz ultra-violeta produz queimaduras severas. Utilize máscara/óculos de

proteção adequados