Continuando os Estudos com Eletroforese...

Para observar ácidos nucléicos em gel de agarose, deve-se corá-los e
submetê-los a uma luz ultravioleta. O corante mais comum é o brometo de etídeo,
que se intercala entre as bases do DNA (Ausubel, 1994).

Protocolo para análise de produtos de amplificação e fragmentos de

digestão em gel de agarose

gel 1% ® 0,3 g de agarose para 30 mL de gel, que deve ser preparado com

tampão Tris-Borato-EDTA 1X. Para isso, aplicar 5 ml de produto de amplificação

+ 1 ml de loading buffer.

gel 4% ® 1,2 g de agarose de baixo ponto de fusão para 30 mL de gel, que deve

ser preparado com tampão Tris-Borato-EDTA 1X. Utilizado para analisar o

resultado das digestões com enzimas de restrição. Aplicar todo o produto da

digestão (13 ml) + 2,6 ml de loading buffer.

1. Pesar a agarose

2. Colocá-la em um erlenmeyer contendo o volume necessário de tampão TBE 1X

3. Aquecer no forno de microondas até iniciar a ebulição (aproximadamente 30

segundos em potência média para um gel de 30 mL). Agitar o frasco e retornar

ao forno de microondas por mais alguns segundos

4. Aguardar a redução da temperatura para aproximadamente 60 

o C e adicionar

Brometo de Etídio, na quantidade indicada para cada gel

5. Verter no molde previamente nivelado e colocar os pentes

6. Após a solidificação, colocar o gel na cuba de eletroforese e cobrir com tampão

TBE 1X

7. Aplicar as amostras acrescidas de loading buffer e aplicar a corrente de acordo

com o tamanho do gel

O Brometo de etídio é um potente agente mutagênico. Utilizar luvas e máscara

para preparar a solução estoque e manipular os géis

A luz ultra-violeta produz queimaduras severas. Utilize máscara/óculos de

proteção adequados