ELETROFORESE DE ÁCIDOS NUCLÉICOS

ELETROFORESE DE ÁCIDOS NUCLÉICOS

                                                                                               João José de Simoni Gouveia

                                                                                              Luciana Correia de Almeida Regitano

A eletroforese é uma técnica utilizada para separar, identificar e purificar

moléculas carregadas (como DNA e proteínas) (Maniatis, 1987). Este método foi

introduzido por Tiselius, no ano de 1937 (Brammer e Iorczeski, 2002) e é simples,

rápido e capaz de separar fragmentos que não são adequadamente separados por

outras técnicas (Sambrook e Russel, 2002).

A técnica apresenta basicamente um sistema de suporte (gel de agarose, por

exemplo), um tampão no qual está imerso o gel e os eletrodos nas extremidades da

cuba onde estão contidos o tampão e o gel.

 Sob a influência de um campo elétrico, moléculas carregadas e partículas

migram em direção ao pólo oposto. A carga e a massa das moléculas fazem com

que elas migrem em velocidades diferentes e, portanto, propiciam a separação

destas (Westermeier, 2005). Como os ácidos nucléicos (DNA e RNA) possuem

carga elétrica negativa (devido ao grupamento fosfato) eles sempre migrarão em

direção ao pólo positivo. Então, o fator determinante da taxa de migração será a

massa da molécula (quando se fala em ácidos nucléicos, a massa é diretamente

proporcional ao tamanho da molécula).

Existem vários meios de suporte que podem ser utilizados (papel filtro,

membrana de celulose, gel de agarose, gel de poliacrilamida). No caso dos géis, a

porosidade (que tem uma relação direta com a concentração de agarose) determina

o poder de separação (Brammer, 2002). Na escolha do tampão, o principal fator a ser considerado é sua capacidade

tamponante. Os dois tampões mais utilizados na eletroforese de ácidos nucléicos

são o TAE (Tris, Acetato e EDTA) e o TBE (Tris, Borato e EDTA). O TAE é mais

utilizado que o TBE, porém é mais facilmente exaurido durante corridas longas ou

com alta voltagem. O TBE, apesar da melhor capacidade tamponante, deve ser

evitado quando se deseja purificar os ácidos nucléicos do gel (Ausubel, 1994).

Alguns fatores alteram a migração das moléculas através do gel, dentre eles

podemos citar: concentração de agarose, conformação do DNA e intensidade da

corrente.

A concentração de agarose atua de forma importante na eletroforese, pois ela

determina a faixa de tamanho das moléculas de DNA que podem ser separadas.

Para observar ácidos nucléicos em gel de agarose, deve-se corá-los e

submetê-los a uma luz ultravioleta. O corante mais comum é o brometo de etídeo,

que se intercala entre as bases do DNA (Ausubel, 1994).